林国华广州管圆线虫期幼虫感染河蚬河 [复制链接]

广州管圆线虫(Angiostrongyluscantonensis)属线形动物门，线虫纲圆线虫目，后圆线虫科，管圆线虫属。在年，我国学者陈心陶教授首次在广州家鼠及褐家鼠体内发现，于年确认为新属、新种，将其命名为广州管圆线虫。年首例广州管圆线虫病在我国台湾发现。幼虫侵入人体中枢神经系统，引起嗜酸粒细胞增多性脑膜炎或脑膜脑炎，临床上称为广州管圆线虫病。我国福州、北京、广东、云南和台湾等地出现广州管圆线虫病暴发流行。广州管圆线虫各发育阶段的生活史分为卵、幼虫(Ⅰ~Ⅴ期）与成虫3个阶段。

本实验用第Ⅰ期幼虫感染河蚬、河蚌，在其体内检及广州广圆线虫第Ⅲ期幼虫，以之感染大鼠后检获虫卵和成虫，为实验室增加中间宿主和实验资源及提供生态学研究资料。

1.1材料

1.1.1实验动物

健康大鼠（福建省疾病预防控制中心*理科提供）12只，体重~g。河蚬、河蚌从福州市市场购买，河蚌50个，每个体重52~63g；河蚬3kg，每粒重3~5g。

1.1.2实验材料检查

随机抽取河蚌8个、河蚬20粒去壳，分别取肉膜压片法镜检和捣碎均浆法，用40目筛过滤，净水器过滤的自来水冲洗、沉淀后，沉渣直接在光镜下镜检确认河蚬、河蚌（图1A、图1B）没有广州管圆线虫Ⅲ期幼虫的感染，以这批河蚬、河蚌为中间宿主。检查河蚬、河蚌的感染度，去壳称重。

A河蚬3~5g/个

B河蚌52~63g/个

C河蚬、河蚌感染Ⅲ期幼虫方法

图1河蚬、河蚌(中间宿主）与感染方法

1.2方法

1.2.1大白鼠实验感染

大白鼠12只，随机分A、B、C三组，每组4只。在广州管圆线虫疫源地福建省龙海市海澄镇采集褐云玛瑙螺，肺检法解剖镜下确认感染广州管圆线虫Ⅲ期幼虫，再用捣碎机捣烂，过滤，滤液自然沉淀后取沉渣在解剖镜下分离Ⅲ期幼虫计数，按参考文献Ⅲ期幼虫分离，经口饮水感染大白鼠，感染量分别为条、50和25条Ⅲ期幼虫/只。观察感染成功率、回收虫数与大鼠死亡情况等，探索最佳感染Ⅰ期幼虫数及各发育阶段虫体的形态结构。

1.2.2中间宿主实验感染条件

制作实验感染水池，长、宽、高分别为、60、25cm，在池15cm处做一个循环排水口，并在排水口处套上一个铁丝网，防止大颗粒鼠粪堵住排水口，池内投放75kg砂石子，满足其良好的生活环境，为保持河蚬、河蚌有较好的生活环境，在池上方25cm处安装一个水龙头加水，维持河蚬、河蚌的正常生活条件。

1.2.3河蚬、河蚌感染方法

将饲养大白鼠鼠笼直接放在感染水池上方，使含有Ⅰ期幼虫鼠粪自然掉入水池内感染河蚬、河蚌（图1C）。实验的水池应控制水流量，防止Ⅰ期幼虫被冲走，使阴性河蚬、河蚌感染并获得广州管圆线虫Ⅲ期幼虫。分别于感染后8、12、16、20、24、28d以压片法、捣碎法等镜检河蚬、河蚌感染情况。从感染河蚬、河蚌分离出Ⅲ期幼虫，再次感染5只大白鼠，每只口服感染20条Ⅲ期幼虫。45d收集鼠粪镜检大白鼠Ⅰ期幼虫和排虫量。

2.1大白鼠病死率

感染大白鼠12只，在12~83d死亡8只。其中A组死亡4只（第12~30d）,共检出成虫93条；B组死亡3只（第26~40d），共检出成虫51条；C组死亡1只（第58d），检出成虫14条。

2.2Ⅲ期幼虫大白鼠体内阶段

解剖死亡大白鼠，发现感染第12d死亡大白鼠脑表层见Ⅳ期幼虫；感染第16d，鼠脑部和心肺中见Ⅴ期幼虫，30d后鼠脑虫体检查阴性，虫体基本从脑部全部转移至心肺寄生，肺动脉血管可见成堆的虫体。

2.3鼠粪查到Ⅰ期幼虫时间

40d解剖病死大白鼠，可见鼠肺成虫、虫卵、Ⅰ期幼虫。感染84d（12周）剩余4只大白鼠全部杀死解剖，在心、肺部位共查到广州管圆线虫26条成虫，分别为4、6、7、9条，成虫雌虫体内见大量虫卵，雌虫呈黑白相间，大小（12~46)mm×(0.23~0.67)mm，雄虫呈灰白色，大小（11~25)mm×(0.2~0.51)mm（图2D1)。成虫雌虫体内可见未排出的大量虫卵(图2D2），大小(63.8~81.9)μm×(33.5~47.6)μm（图2E），取肺动脉血镜检可见Ⅰ期幼虫大小(~)μm×(14~17)μm，尾部尖，背侧有一刀切样的凹陷,见图2F。

D1寄生鼠肺成虫

D2放大的成虫体内可见成堆虫卵

E鼠肺动脉的虫卵椭圆形，壳薄透明

F鼠肺动脉的Ⅰ期幼虫

G1、G2河蚬体内分离Ⅲ期幼虫

图2广州管圆线虫各发育阶段虫体的形态结构

2.4河蚬、河蚌感染Ⅰ期幼虫发育情况

感染8d和12d解剖河蚬、河蚌，可见Ⅰ期幼虫经第1次蜕皮成Ⅱ期；感染16d和20dⅡ期幼虫经第2次蜕皮成Ⅲ期幼虫。在河蚬、河蚌体内幼虫有发育不一致现象，可能为感染时差所致。Ⅲ期幼虫寄生于河蚬、河蚌各部位，在体膜形成圆形幼虫结节，解剖镜下有折光颗粒，颗粒非常明显，Ⅲ期幼虫形态结构，头端钝圆，尾部尖细，内层鞘膜质地较软，外层鞘膜较韧，大小(~)μm×(21~26)μm（图2G1和图2G2）。重复感染时间越长，河蚬、河蚌感染Ⅰ期幼虫成倍增多，河蚬、河蚌感染度加重，河蚬、河蚌逐渐死亡，感染第28d检查,河蚬平均感染虫6.9条/个，组织为1.73条/g；河蚌为.3条/个和2.84条/g，见表1。

表1实验河蚬、河蚌Ⅲ期幼虫感染度

2.5河蚬、河蚌分离的Ⅲ期幼虫再感染大白鼠

口服感染5只大白鼠45d鼠粪均检出Ⅰ期幼虫。感染63d（9周）5只大白鼠全部杀死解剖，在心、肺部位共查到广州管圆线虫37条成虫，鼠肺动脉中可见各期虫卵（单细胞、多细胞、仔虫期），鼠肺动脉的虫卵椭圆形，壳薄透明，刚产卵为单个细胞卵，卵细胞不断分裂，很快发育成坯胎卵。

河蚌（F.mussel）背角无齿蚌，俗名菜蚌、湖蚌等，是蚌科无齿蚌属的一种。我国各地江河、湖沼中均有分布，肉可食。河蚬（C.fluminea）又称*蚬、金蚶等，常栖息在河川、湖泊或水田等淡水性的环境中，喜砂或泥质的环境。河蚬肉味鲜美，营养丰富，除鲜食外，还可以加工成蚬干。在我国和东南亚一些国家，深受人们喜欢。

广州管圆线虫Ⅱ、Ⅲ期幼虫主要寄生在福寿螺、褐云玛瑙螺、蛞蝓等软体动物体内，Ⅳ、Ⅴ期幼虫和成虫寄生于终宿主鼠体内。Ⅰ期幼虫可侵入软体动物或被软体动物所吞噬，并在其体内发育为Ⅲ期幼虫，鼠类食入含Ⅲ期幼虫的软体动物后，幼虫在其体内可发育为成虫并产卵，虫卵在鼠心、肺血管内孵出Ⅰ期幼虫并随血循环经消化道随粪便排出，完成广州管圆线虫的生活史发育阶段。

经资料查证我国此前未见河蚌、河蚬在实验室人工感染广州管圆线虫Ⅰ期幼虫的报告。作者在实验室条件下用广州管圆线虫Ⅰ期幼虫感染河蚬、河蚌以证实河蚬、河蚌能够作为广州管圆线虫中间宿主；并从河蚬、河蚌分离出Ⅲ期幼虫，以之感染大鼠也获得成功。证实河蚬、河蚌可作为广州管圆线虫中间宿主。

实验证实,广州管圆线虫Ⅲ期幼虫条感染大白鼠，虫体负荷量太高，全部在4周内因脑部损害而死亡；50条感染大白鼠，5周内有75%(3/4)死亡；25条Ⅲ期幼虫感染组，7周死亡率仅为25%(1/4)。显示以25条Ⅲ期幼虫，经口感染大白鼠耐受性较好，可存活12周以上，适合用于鼠体内各发育阶段虫体建立。

广州管圆线虫Ⅲ期幼虫在鼠体迁移，侵犯中枢神经系统引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜脑炎，以脑脊液中嗜酸性粒细胞显著升高为特征。病变主要集中在脑组织，还包括脑干、小脑和脊髓等处。病变为充血、出血、脑组织损伤及引起巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞和嗜酸性粒细胞所组成的肉芽肿性炎症反应。感染虫数多，症状越重，以致鼠的死亡。

为提高河蚬、河蚌和Ⅰ期至Ⅲ期幼虫高存活力，降低死亡率，还应保证实验感染水池清澈，感染池水要自然新鲜水缓缓流淌，以提高水质含氧量，确保河蚬、河蚌和Ⅰ期幼虫有良好感染环境，提高感染率。作者在实验室下，用Ⅰ期幼虫感染河蚬、河蚌，感染第16d解剖镜检，查出广州管圆线虫Ⅲ期幼虫；在感染28d后解剖，压片镜检和捣烂其肉组织，水洗沉淀镜检，发现感染度成倍增加。虽然自然界河蚬、河蚌感染广州管圆线虫Ⅰ期幼虫机遇较低，但生食或半生吃河蚌、河蚬肉，也有感染广州管圆线虫而患病的可能。应告诫广大群众，为防止病从口入，不要生食或半生食河蚬、河蚌肉。

(文章来源：.16;06中国热带医学林国华等参考文献略)